【産品名稱】

商品名稱：**色葡萄球菌(SA)核酸檢測試劑盒

Name ：Staphylococcus aureus (SA) nucleic acid detection kit (PCR- fluorescence probe method)

【包裝規格】50T/盒

**色葡萄球菌(SA)核酸檢測試劑盒【預期用途】

本試劑盒适用于檢測标本中指标的定量檢測，輔助診斷。

【試劑組成】

詳見說明書

注：

1） 不同批号試劑不能混用。

2） 試劑盒内各試劑組份足夠包裝規格所标示的檢測次數。

【檢驗原理】

本試劑盒對指标特異核酸序列設計引物和探針，用一步法熒光RT-PCR 技術對指标 RNA 進行體外擴增檢測，用于對可疑感染者的病原學診斷。

【使用方法】

1. 樣品處理（樣本處理區）

1.1 樣本前處理

【标本采集】

拭子：應使用與用采樣拭子，适度拭抹咽後壁和兩側扁桃體部位，應避免觸及舌 部 ； 迅 速 将 拭 子 放 入 标 本 采 集 管 中 ， 旋 緊 管 蓋 并 密 封 ， 以 防 幹 燥 。

全血：疑似感染的血 2mL 至 EDTA-2Na 抗凝管，8000rpm 離心 2min，取适量上清液于 1.5mL 滅菌離心管中。痰： 以清晨的第一口痰為宜。先用清水漱口，囑患者用力咳出深部的痰于無菌樣本保存管，密封，即可送檢。

【标本采集】

病死或撲殺禽，取喉氣管、腦、胸肌、心肌和肺等組織；待檢活禽，用棉拭子取分泌物或排洩物，置于 1mL 50%甘油生理鹽水中。

【保存和運輸】

上述标本短期内可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但丌能超過 6 個月，标本運送應采用 2~8℃冰袋運輸，嚴禁反複凍融。

1.2DNA 提取

1) 對上述處理好的标本加入 50μL 核酸提取液，100℃恒溫處理 10min，13,000rpm 離心 5min，取上清液轉移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；

2) DNA 的提取也可以采用上海烜雅生物科技有限公司生産的 DNA 提取試劑*（離心柱提取法），請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

1.2 RNA 提取

推薦采用上海晅科生物科技有限公司生産的DNA 提取試劑*（離心柱提取法），請按照試劑盒說明書進行操作。

2. 試劑配制（試劑準備區）

根據待檢測樣本總數，設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：

将混合好的測試反應液分裝到 PCR 反應管中，21uL/管。

3. 加樣（樣本處理區）

将步驟 1 提取的 RNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μL，分别加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4. PCR 擴增（核酸擴增區）

4.1 将待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽内；

4.2 設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25μL；熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光，選擇 None 即可。

4.3 推薦循環參數設置：

5. 結果分析判定

5.1 結果分析條件設定

設置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析，當曲線出現整體傾斜時，根據分析後圖像調節 Baseline 的start 值(一般可在 3~15 範圍内調節)、

stop 值(一般可在 5~20 範圍内調節)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動阈值線至高于陰性對照)，重新分析結果。

5.2 結果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35.0，且有明顯的擴增曲線。

可疑：檢測通道 Ct 值>35.0，且出現明顯曲線的樣本建議重複試驗，重複試驗結果如果同樣出現 Ct 值≤35.0 和明顯擴增曲線則為陽性，否則為陰性。

陰性：樣本檢測結果無 Ct 值且無明顯的擴增曲線。

6. 質控标準

陰性質控品：無明顯擴增曲線且無 Ct 值顯示；

陽性質控品：擴增曲線有明顯指數生長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。

7. 檢測方法的局限性

① 樣本檢測結果不樣本收集、處理、運送以及保存質量有關；

②樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現假陽性結果；

③陽性對照、擴增産物洩漏，會導緻假陽性結果；

④病原體在流行過程中基因突變、重組，會導緻假陰性結果；

⑤不同的提取方法存在提取效率差異，會導緻假陰性結果；

⑥試劑運輸，保存不當或試劑配制不準确引起的試劑檢測效能下降，出現假陰性或定量檢測不準确的結果；

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運輸、反複凍融次數不超過 5 次，有效期 12 個月。

【适用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

【标本采集】

病死或撲殺動物，取水泡皮及水泡液；待檢活動物，取 O/P 液 2~3mL。

【保存和運輸】

上述标本短期内可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過 6 個月，标本運送應采用 2~8℃冰袋運輸，嚴禁反複凍融。

【産品圖片】

【生産企業】

企業名稱：上海晅科生物科技有限公司

上海晅科生物科技有限公司生産的熒光PCR檢測試劑盒質量高，價格低，售後有保證。為您的實驗保駕護航。

請直接向我司客服索取說明書

本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷。