産氣莢膜梭菌α毒素ELISA檢測試劑盒

産氣莢膜梭菌α毒素ELISA檢測試劑盒

            使用說明書

本試劑盒僅供研究使用。                                                                                                                     96T

使用目的：

本試劑盒用于測定微生物樣本中産氣莢膜梭菌α毒素含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定标本中産氣莢膜梭菌α毒素水平。用純化的産氣莢膜梭菌α毒素抗體包被微孔闆，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入産氣莢膜梭菌α毒素，再與HRP标記的産氣莢膜梭菌α毒素抗體結合，形成抗體-抗原-酶标抗體複合物，經過*洗滌後加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顔色的深淺和樣品中的産氣莢膜梭菌α毒素呈正相關。用酶标儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過标準曲線計算樣品中産氣莢膜梭菌α毒素濃度。

試劑盒組成

标本要求

1．标本采集後盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可将标本放于-20℃保存，但應避免反複凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1.         标準品的稀釋：本試劑盒提供原倍标準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2.         加樣：分别設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶标試劑，其餘各步操作相同）、标準孔、待測樣品孔。在酶标包被闆上标準品準确加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然後再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣将樣品加于酶标闆孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.         溫育：用封闆膜封闆後置37℃溫育30分鐘。  

4.         配液：将30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用

5.         洗滌：小心揭掉封闆膜，棄去液體，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置30秒後棄去，如此重複5次，拍幹。

6.         加酶：每孔加入酶标試劑50μl，空白孔除外。

7.         溫育：操作同3。

8.         洗滌：操作同5。

9.         顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.

10.     終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.     測定：以空白孔調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液後15分鐘以内進行。

操作程序總結：

計算

  以标準物的濃度為橫坐标，OD值為縱坐标，在坐标紙上繪出标準曲線，根據樣品的OD值由标準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用标準物的濃度與OD值計算出标準曲線的直線回歸方程式，将樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘後方可使用，酶标包被闆開封後如未用完，闆條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準确性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘内，如标本數量多，推薦使用排槍加樣。

4．  請每次測定的同時做标準曲線，最好做複孔。如标本中待測物質含量過高（樣本OD值大于标準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）後再測定，計算時請最後乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5．  封闆膜隻限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請避光保存。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶标儀讀數為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9．本試劑不同批号組分不得混用。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月

生産企業

上海烜雅生物科技有限公司