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質粒菌株産品操作說明

更新日期: 2021-07-12
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一、擴增流程
收到産品後,請先根據産品管壁标簽來判斷産品形式,并在擴增前準确查找該質粒菌株的抗性、感受态和培養溫度。
1、質粒幹粉(常溫運輸,存于-20度,90天保質期,請務必轉化挑單克隆培養,不要直接使用和測序)
①收到質粒幹粉後請先5000rpm離心1min,再加入20μl ddH2O去離子水溶解質粒;
②取1支100μl 感受态于冰上解凍10min,加入2μl質粒,再冰浴30min後,42℃熱激60s,不要攪動,再冰浴2min;(從第二步開始均要在超淨工作台中無菌操作)

③加入900μl無抗的LB液體培養基,180rpm震蕩37℃培養45min;
④6000rpm離心5min,僅留100μl上清液重懸細菌沉澱,并塗布至目标質粒抗性的LB平闆上;(可使用本平台的平闆塗布專用玻璃珠進行塗布,可以比傳統塗布方法獲得更多轉化子)
⑤将平闆正向培養1h,再倒置37℃培養14h。如果要求是30度則培養20h;
(菌落過多則将質粒稀釋後再轉化。沒有菌落則加入10μl質粒轉化。另不要直接轉表達感受态,要先轉克隆感受态,重提質粒後再導入表達感受态)

⑥挑取單菌落至LB液體培養基中,加入對應抗生素,220rpm震蕩培養14h,根據實驗需要和質粒提取試劑盒說明書提取質粒。
2、甘油菌種(冰袋運輸,存于-80℃,保質期90天,請務必劃線挑單克隆培養)
四區劃線後挑單菌落培養,酵母菌需要先液體複蘇再四區劃線,再挑單菌落液體培養。
3、穿刺菌種(冰袋運輸,存于4℃,保質期7天)
穿刺接種,液體培養後四區劃線,再挑單菌落液體培養。
4、菌落平闆(冰袋運輸,存于4℃,保質期7天)
直接挑取單菌落至液體培養基中。

5、液體質粒(冰袋運輸,存于-20℃,保質期90天)
單獨提取的液體質粒收到後可直接使用。
6、濾紙質粒(常溫運輸,存于-20度,90天保質期,請務必轉化挑單克隆培養,不要直接使用和測序)
收到貨後将濾紙畫圈部分剪下放入EP管中,加100ul無菌水将濾紙浸濕并浸泡5min,吸取5ul質粒轉化,離心全塗。



二、轉化圖片

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