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菌種的有效保存

更新日期: 2019-07-22
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菌種的有效保存
用于發酵過程作為活細胞催化劑的微生物,包括細菌、放線菌、酵母菌和黴菌四大類。來源于自然界大量的微生物,從中經分離并篩選出有用菌種,再加以改良,貯存待用于生産。
使優良菌種的性狀保持穩定,人為地創造條件,使菌種的新陳代謝活動處于不活潑狀态,即選取優良菌種的休眠體(孢子或芽孢)或富有生命力的懸浮液在低溫或脫水狀态下保存。
脫水存法
1.沙土保存法,能産孢子的細菌、放線菌及黴菌可采用此法保存,即将沙和土以3:2比例混合,經稀酸處理洗淨過篩,裝入小試管内,裝置高度為1cm;滅菌2~3次,烘幹後即可将在斜面培養基上生長良好的孢子,用無菌蒸餾水2~2.5ml制成孢子懸液,吸取少許加入沙土管中,經真空抽幹,外觀呈松散狀态,于4℃冰箱保存,保存期可達5~7年。
2.冷凍幹燥法,将孢子懸浮液與保護劑(一般用脫脂牛奶或血清)相混合,放在安瓿管内于-20~-30℃的乙醇浴中速凍。然後,在低溫下用真空泵抽幹,并用五氧化二磷或幹冰使水汽結凍,熔封安瓿管,于低溫下保存。保存期可達5~10年之久。
③ 石蠟油封存法,在斜面菌種培養物上,倒上滅菌後的石蠟油,高出斜面1cm,于4℃冰箱或低溫幹燥處保存,此法不适用于能利用石蠟油作碳源的微生物,保存期為一年以上。
低溫存法
1.簡單保存法,将瓊脂斜面孢子培養物、菌絲懸浮液以及由麸皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養物置于4℃冰箱保存,保存時間不超過1~2個月,若将谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時間可達3~4個月;
2.液氮超低溫保存法,将生長穩定期的細胞懸浮在10%甘油或其他低冰點液體中,密封于安瓿管内,然後控制冷卻速度,使安瓿管溫度逐步下降至 -35℃時,即可置于-150~-196℃的液氮罐中保存。大多數微生物如病毒、噬菌體、多種細菌、放線菌、酵母和原蟲、特别是一些用冷凍幹燥法有困難的微生物,都可用此法長期保存。
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